fa اثر دی متیل آرژینین نامتقارن و ان جی- مونو متیل آرژینین بر مهار فعالیت نیتریک اکسیدسنتاز بيوشيمي Biochemistry تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : نیتریک اکسید سنتاز (NOS) آنزیمی است که در تولید نیتریک اکسید (NO) نقش دارد. علیرغم اثرات مفید NO در سیستم‌های مختلف بدن، تولید بیش از حد آن به خاطر تولید گونه‌های نیتروژن فعال (RNS) و نیتروزیلاسیون پروتئین‌ها، دارای اثرات سمی است. این مطالعه به منظور تعیین اثر دی متیل آرژینین نامتقارن (ADMA) و ان جی- مونو متیل آرژینین (L-NMMA) بر مهار فعالیت نیتریک اکسید سنتاز انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه آزمایشگاهی آنزیم NOS طی مراحل هموژنیزاسیون، رسوب با سولفات آمونیوم اشباع و کروماتوگرافی روی ستون‌های DEAE-32 Cellulose و 2&#39;,5&#39;-ADP-agarose از 500 گرم بافت تازه کلیه گوسفند جدا گردید. طی مراحل جداسازی میزان پروتئین به روش برادفورد و فعالیت آنزیم NOS به روش گریس اندازه‌گیری شد و اثرات مهار کنندگی ADMA و L-NMMA در غلظت 25 میکرومولار بر فعالیت NOS تعیین گردید. یافته‌ها : فعالیت ویژه و بازده خالص‌سازی NOS به ترتیب 0.6 واحد بر میلی‌گرم پروتئین و 0.9% به‌دست آمد. وزن ملکولی آنزیم با استفاده از SDS-PAGE ، KD 54 حاصل شد. ADMA وL-NMMA در غلظت‌های 25 میکرو مولار موجب کاهش فعالیت آنزیم به ترتیب در حدود 76 درصد و 61.2% گردید. میزان Km آنزیم NOS در غیاب و در حضور ADMA و L-NMMA به ترتیب 5.32 میکرومول، 31.25 میکرومول (P<0.001) و 14.29 میکرومول (P<0.001) به دست آمد و در Vmax آنزیم NOS در غیاب و یا در حضور این ترکیبات تغییری ایجاد نشد. نتیجه‌گیری : ADMA و L-NMMA دارای اثر بازدارندگی رقابتی بر فعالیت آنزیم NOS بوده و ADMA در مقایسه با L-NMMA دارای قدرت بازدارندگی بیشتری است. Background and Objective: Nitric oxide synthase (NOS) paly a role in nitric oxide (NO) generation. Despite the beneficial effects of NO on different body systems its overproduction of produce reactive nitrogen species (RNS) and nitrosilation of proteins. This study was done to evaluate the effect of asymmetric dimethylarginine (ADMA) and NG-Monomethyl-L-arginine methyl ester (L-NMMA) on inhibition of nitric oxide synthase activity. Materials and Methods: In this laboratory study, Nitric oxide synthase was extracted from 500 grams of sheep kidney by homogenization, ammonium sulphate precipitation and column chromatography on DEAE-32 Cellulose and 2&#39;, 5&#39;-ADP-agarose. During purification, protein content was measured according to the Bradford and enzyme activity was assayed using the Griess reactions the inhibitory effects of 25 &mu;&Mu; concentrations of ADMA and L-NMMA on purified enzyme were determined. Results: Specific activity and yield of NOS were 0.6 units/mg protein and 0.9%, respectively. Molecular weight of purified enzyme was 54 KD with SDS-PAGE. ADMA and L-NMMA in 25 &mu;&Mu; concentrations reduced enzyme activity by 76 and 61.2%, respectively. Km values for NOS in absence and in presence of ADMA and L-NMMA were 5.32 &mu;M, 31.25 &mu;M (P<0.05) and 14.29 &mu;M (P<0.05), respectively. Vmax for NOS in absence and presence of inhibitors was not changed. Conclusion: ADMA and L-NMMA have competitive inhibitory effect on NOS activity and ADMA have higher inhibitory effect than L-NMMA. نیتریک اکسید سنتاز , دی متیل آرژینین نامتقارن , ان جی- مونو متیل آرژینین , کلیه Nitric oxide synthase, Asymmetric dimethyl Arginine, NG-monomethyl-L-arginine methyl ester, Kidney 84 92 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-686&slc_lang=fa&sid=1 Kadkhodaei Elyaderani M منیژه کدخدایی الیادرانی 5900319475328460050564 5900319475328460050564 No Associate Professor, Department of Biochemistry, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran دانشیار گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز Malek Askar AM علی محمد ملک عسکر 5900319475328460050565 5900319475328460050565 No Assistant Professor, Department of Genetics, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran استادیار گروه ژنتیک، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز Rostami M مراد رستمی morad_r56@yahoo.com 5900319475328460050566 5900319475328460050566 Yes MSc in Biochemistry, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran کارشناس ارشد بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز Aberomand M محمد آبرومند 5900319475328460050567 5900319475328460050567 No Assistant Professor, Department of Biochemistry, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran استادیار گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز Kheirollah AR علیرضا خیراله 5900319475328460050568 5900319475328460050568 No Assistant Professor, Department of Biochemistry, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran استادیار گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز